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DNA亲子鉴定之唾液(斑)DNA提取

时间:2022-08-17 作者:admin 阅读:249
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唾液(斑)中含有脱落的口腔上皮细胞,唾液(斑)上皮细胞DNA的提取可采用有机溶剂提取法,Chelex-100提取法和磷酸缓冲液法,具体操作如下:

1.有机提取法:

(1)将适量标本剪碎置离心管中,加入Iml生理盐水轻轻混匀冲洗细胞,5000r/min离J心

10min,弃上清后再重复一遍。

(2)在沉淀的上皮细胞中加入400t/lTES(15mmol/,15mmol/,15mmol/LNaCl),lOOoC温浴lOmin,冷却至室温再加10%SDS,lOmg/mlPK,使其终浓度分别为1%,lOOtLg/ml,37℃消化过夜。

(3)等体积饱和酚和氯仿各抽提2次,上清用2.5倍体积冰无水乙醇沉淀,1000r/min离心lOmin,沉淀晾干,灭菌去离子水溶解备用(当样品中DNA含量很少时,如果用TE缓冲液溶解,其中的EDTA浓度过高,抑制TaqDNA聚合酶活性,所以此时建议用无菌水溶解DNA)。

2.Chelex-100提取法:

(1)将适量斑迹剪碎,加入装有200V15%Chelex溶液的离心管中。

(2)特lOmg/ml蛋白酶K2阻加入管中,轻轻混匀。高速震荡溶液5~10s,一定要使沉淀悬浮起来。

(3)在56℃水浴中温浴20min,高速震荡溶液5~10s。

(4)100℃煮沸8min,高速震荡溶液5~10s。

(5)在室温下15000r/min离心2min。上清用于PCR反应。4℃保存备用或-20℃储存。

3.磷酸盐缓冲液法:

(1)将适量斑迹剪碎,置于装有ImlPBS缓冲液中,1500r/min离心5min,沉淀细胞,弃上清。

(2)用50—300µl钾缓冲液悬起细胞沉淀。55℃消化1h(裂解细胞,释放DNA)。

(3)95℃水浴10min,灭活蛋白酶K,-20℃保存备用。

(二)口腔拭子中DNA的提取

1.将其放入装有200til的5%c1.elex-100的1.5ml离心管内,轻轻搅动,使细胞脱落。

2.56℃温Y15~30min,高速振荡5~10S。

3.100℃煮沸8min后立即高速振荡5~10s,15000r/min离心2min。上清即可用于进行PCR反应。

注意事项:

唾液斑检材DNA提取,检材加入量不易量化,应结合检材具体情况调整。建议如下:

1.烟蒂中能否提取出DNA与烟蒂是否沾有口腔脱藩上皮细胞有关,也与抽烟者抽烟时口含烟蒂多少的习惯有关,并不是所有烟蒂均能提取出足够量的染色体DNA用于检验,DNA的提取必需用沾有唾液或口唇上皮细胞的那部分检材。不能将整个烟蒂全部投入,否则过大的载体会影响DNA的提取。烟蒂检材一般剪取0.3~0.5cm高的烟蒂,将外层纸剪碎放入1.5ml离心管中;

2.口腔拭子是国外建立DNA数据库首选的检材,立法时它属体外标本。因此,用口腔拭子进行PCR分型很多见。取单根拭子头部的1/3~1/4装入1.5ml离心管中或用牙签刮拭口腔粘膜。

3.口香糖检材取1/2左右,用无菌剪刀尽量剪碎,放入1.5ml离心管,如含泥土等,先用无菌水洗干净。

4.咬痕唾液斑检材,纱布或棉拭子擦拭咬痕部位。用纱布提取的剪取0.1~0.2cm2,棉拭子取头部1/2外层部分。

腹中胎儿亲子鉴定要怀孕多久才能做鉴定?

鉴定分析:

无创亲子鉴定,它是指通过抽取孕妇的外周血来提取胎儿的DNA,进而和男方的DNA来进行比对,判断胎儿是谁的孩子,这个亲子鉴定的准确性能达到99%以上,一般在怀孕五-八周以后就可以做。

意见建议:

孕期无创胎儿亲子鉴定怀孕五周可以做。

鉴定时间:怀孕6周直到胎儿诞生前。

鉴定方法:利用新一代DNA测序技术对母体外周血中的游离DNA片段(包含胎儿游离DNA)进行测序、生物信息分析,从中得到胎儿的遗传信息,并与假定父亲的DNA信息进行比对,实现确认亲子关系。

鉴定特点:取孕妇10ml静脉血做亲子鉴定,只需要孕妇外周血,孕妇没有痛苦,而且鉴定的准确率高,能够避免胎儿宫内感染以及流产。

鉴定结果:结果准确率达99.9999999%,一般3-5天出鉴定结果。

上海哪里可以做孕妇dna亲子鉴定?

鉴定分析:

上海安康可以做孕妇dna亲子鉴定的咨询,地址:上海市浦东新区浦东南路855号世界广场1103室,孕妇dna亲子鉴定建议办理无创孕期亲子鉴定,只需采取准妈妈10ml静脉血即可从中提取dna胎儿样本与疑父进行亲子鉴定。

意见建议:

上海安康亲子鉴定咨询中心是一家本地化亲子鉴定咨询点,咨询范围有:个人亲子鉴定,无创胎儿亲子鉴定,旁系亲缘鉴定、DNA身份证等咨询。上海安康亲子鉴定咨询机构在黄浦区、徐汇区、长宁区、静安区、普陀区、虹口区、杨浦区、闵行区、宝山区、嘉定区、金山区、松江区、青浦区、奉贤区、崇明区、浦东新区等上海及周边城市地区均可提供亲子鉴定咨询服务,其他省市亦可咨询客服。中心地址位于上海市浦东新区浦东南路855号世界广场1103室。

无创产前亲子鉴定,只需抽取准妈妈手臂上10ml-12ml静脉血作为胎儿样本,对胎儿没有任何影响和伤害,是非常安全的,孕妈妈可以正常吃东西。实验室采用先进的lllumina测序设备,采用40000+的检查位点,准确率高达99.9999%,依据《亲权鉴定技术规范》结果精准度更高,累计非父排除率大于1-10-460,达到累积个体识别率大于1-10-2200,(准确度接近100%)

成都做胎儿亲子鉴定多少钱?

鉴定分析:

无创胎儿亲子鉴定是一种“三联体”鉴定,需提供母亲DNA样本、假定父亲DNA样本以及胎儿样本。无创静脉血是母亲样本和男方样本就可以的。由于胎儿亲子鉴定样本的特殊性以及DNA的不易提取,胎儿亲子鉴定费用略贵一些,为5000-6000元/例。具体可以咨询成都华川都基因客服。

意见建议:

化州胎儿亲子鉴定多少钱

1.首先要确定受孕时间。胎儿亲子鉴定一般要求受孕时间5周半以上。此时,采集的样本更加准确和安全。如果胎儿流产,可以直接取本品鉴定。

2.选择正规的亲子鉴定机构,无论做什么样的亲子鉴定,选择正规的亲子鉴定机构都很重要。

3.选样,一般取常规血样,只取孕妇外周血,费用5000元左右。

4.等待结果,3-5天可以出结果,以鉴定机构的标准为准。

5.样品可以邮寄送检,也可以自己送检,也可以由亲子鉴定机构送检。

中山做dna鉴定需要提供什么?

鉴定分析:

据了解:中山做DNA亲子鉴定需提供被鉴定人双方的血液样本、口腔拭子、带毛囊的毛发、指甲等任意样本都可以的,详情可咨询中山华核基因工作人员。在中山做dna亲子鉴定费用在2600-5000元之间,个人鉴定可匿名进行,实验室采用进口高端设备,鉴定准确率达99.9999.。通常4-7天内出鉴定报告。

意见建议:

亲子鉴定口香糖样本采集流程:

1、取两块及以上的嚼时间15分钟左右的口香糖

2、阴干后放入纸质信封,标记为采样时间及个样本身份。

提示:

1、不能直接用手接触样本。

11周亲子鉴定,怀孕多久可以鉴定出孩子的父亲

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